Loop-Mediated Isothermic Amplification
تکنیک LAMP یک روش همدما است که بر سنتز DNA توسط DNA پلیمراز Bst و مجموعه ای از چهار تا شش پرایمر متکی است.
دو پرایمر داخلی و دو آغازگر بیرونی توالی هدف را مشخص می کنند. یک مجموعه اضافی از پرایمرهای حلقه برای افزایش سرعت تکثیر اضافه می شود
این فرایند به طور کلاسیک یک فرآیند دو مرحله‌ای است که اولین مرحله شامل تولید ساختارهای حلقه ای حاصل از خود هیبریدیزاسیون و مرحله دوم تقویت چرخه است.
محصولات نهایی واکنش LAMP، مولکول های DNA پلیمری، با ساختاری شبیه گل کلم از حلقه های متعدد متشکل از تکرارهای توالی هدف هستند.
محصولات تکثیر را می توان در ژل آگارز پس از الکتروفورز و رنگ آمیزی با اتیدیوم بروماید یا SYBR Green مشاهده کرد.
محصولات همچنین می توانند در زمان تکثیر با کدورت سنجی تجزیه و تحلیل شوند، زیرا یون پیروفسفات آزاد شده از ترکیب تری فسفات دئوکسی نوکلئوتید توسط DNA پلیمراز با یون های منیزیم موجود در بافر واکنش ایجاد رسوب می کند. ردیابی محصولات همچنین با استفاده از فن آوری های فلورسانس و خاموش کننده نیز برای LAMP به کار گرفته شده است.
از آنجایی که LAMP یک فرآیند همدما است و واکنش های مثبت را می توان با اندازه گیری های ساده از جمله کدورت سنجی یا تجسم مستقیم تشخیص داد، به همین دلیل می توان آن را بدون استفاده از تجهیزات گران قیمت انجام داد. برای تشخیص فلورسانس، فلورومترهای همدمای قابل حمل به صورت تجاری در دسترس هستند.
منبع: Henry’s Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods 24th Edition
